p24에 대한 초고감도 디지털 ELISA 적용으로 HIV 평가 개선 가능

Scientific Reports 13권, 기사 번호: 10958(2023) 이 기사 인용

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측정항목 세부정보

결합된 항레트로바이러스 요법(cART)의 출현은 HIV-1 복제 및 전파를 제어하고 관련 질병률 및 사망률을 줄이는 데 중요한 역할을 했습니다. 그러나 cART만으로는 HIV-1을 치료할 수 없습니다. 수명이 길고 잠복 감염되는 면역 세포가 존재하기 때문에 cART가 중단되면 혈장 바이러스혈증을 다시 심게 됩니다. 재활성화된 HIV의 다양성, 바이러스 파생물 및 복제 역학에 대한 추가 이해를 위한 생체 외 배양 방법을 사용한 HIV 치료 전략 평가는 단일 분자 배열(Simoa) 기술을 기반으로 한 초고감도 디지털 ELISA를 사용하여 엔드포인트 검출 감도를 높입니다. . 바이러스 파생물 분석(VOA)에서 기하급수적인 HIV-1 파생물은 5100개의 HIV-1 RNA 복사본이라는 임계 성장 임계값을 초과하는 초기 바이러스 폭발 크기에 의존하는 것으로 나타났습니다. 여기서 우리는 지수 복제 임계값 미만의 바이러스 역학을 특징으로 하는 초민감 HIV-1 Gag p24 농도와 HIV-1 RNA 사본 수 사이의 연관성을 보여줍니다. 단일 게놈 시퀀싱(SGS) 결과 여러 개의 동일한 HIV-1 서열이 존재하는 것으로 나타났습니다. 이는 VOA 초기에 기하급수적 성장의 한계점 이하에서 낮은 수준의 복제가 발생했음을 나타냅니다. 그러나 SGS는 기하급수적인 성장을 확립하지 못한 초민감 방법으로 검출할 수 있는 다양한 관련 HIV 변종을 추가로 밝혔습니다. 전반적으로, 우리의 데이터는 배양에서 기하급수적인 성장을 확립하는 데 필요한 임계값 아래에서 발생하는 바이러스 파생물이 재활성화된 HIV의 복제 능력을 배제하지 않으며 HIV-1 p24의 초민감 검출이 이전에 정량화할 수 없었던 변이체를 검출하는 방법을 제공할 수 있음을 시사합니다. 이러한 데이터는 잠복 바이러스 부담과 HIV-1 치료를 목표로 하는 치료 중재의 효능을 측정하기 위한 다각적 접근 방식에서 Simoa 플랫폼의 사용을 강력히 뒷받침합니다.

복합 항레트로바이러스 요법(cART)은 인간 면역결핍 바이러스 1형(HIV-1) 복제를 제어하고 질병 진행을 크게 늦추지만, 재발할 수 있는 오래 지속되는 바이러스 저장소가 존재하기 때문에 처방된 cART 요법을 평생 준수해야 합니다. 치료가 중단된 경우1,2,3,4,5. 이 저장소는 감염 초기에 확립되어 신체의 림프 조직 전체에 널리 분산되어 있으며 HIV-1 근절에 대한 주요 장벽으로 남아 있습니다6. 휴면 CD4+ T 세포는 잠복 HIV 저장소의 일부를 보유하는 것으로 알려진 잘 특성화된 세포 유형입니다. 현재 다수의 임상 시험에서 잠복기 반전제와 항 HIV 면역 확장이 이들 세포 제거에 미치는 영향을 조사하고 있습니다7,8.

HIV-1 치료 전략의 효능을 확인하려면 잠복 감염 세포 빈도를 정확하게 측정하는 것이 매우 중요합니다. 기존의 PCR 기반 분석은 생체 외 파생물 방법에 비해 향상된 분석 처리 속도와 감도를 제공하지만 개인에서 반동할 수 있는 유능한 저장소와 그렇지 않은 저장소를 구별할 수 없습니다9,10,11. 최근 여러 그룹에서 바이러스 게놈의 보존된 부분에 대해 다중 프라이머와 프로브를 사용하여 손상되지 않은 프로바이러스 게놈의 검출이 개선되었다고 보고했습니다. 그러나 이 방법으로 증폭된 바이러스의 30-40%는 부분적으로 손상되지 않은 프로바이러스의 성공적인 증폭을 제한하는 서열 다형성으로 인해 여전히 결함이 있을 수 있는 것으로 추정됩니다. 다른 극단에는 복제 가능 바이러스 검출을 위한 최적의 표준으로 간주되는 정량적 바이러스 증식 분석(QVOA)과 같은 배양 기반 방법이 있습니다. 그러나 QVOA를 조사한 결과 단일 라운드의 세포 자극 후에도 유도되지 않은 상태로 남아 있는 프로바이러스의 일부로 인해 잠재 저장소의 실제 크기를 과소평가하는 것으로 나타났습니다11,16.